ENZIM PENCERNAAN PADA IKAN MAS (Cyprinus carpio)

ENZIM PENCERNAAN PADA IKAN MAS (Cyprinus carpio)

Pencernaan merupakan proses pemecahan senyawa kompleks menjadi senyawa yang lebih kecil. Proses pemecahan senyawa tersebut menghasilkan energi yang penting bagi kebutuhan sel, jaringan, organ dan makhluk hidup. Pencernaan merupakan proses kimia. Proses kimia membutuhkan adanya enzim untuk perubahan kimia bahan dasarnya. Enzim berperan dalam meningkatkan kecepatan reaksi tanpa mempengaruhi hasil reaksi dan tidak ikut bereaksi. Dalam proses pencernaan, enzim dihasilkan oleh berbagai organ, seperti usus halus, kelenjar ludah dan lambung. Enzim bersifat spesifik dalam proses pemecahan bahan kompleks(karbohidrat, protein, vitamin dan mineral) (Guyton,1992).

Praktikum sistem pencernaan dilakukan dengan mengadakan uji terhadap keberadaan enzim di usus ikan dan menguji fungsi empedu dalam proses pencernaan. Pengujian dilakukan secara tidak langsung, yaitu dengan mendeteksi hasil dari kerja enzim. Pengujian dilakukan terhadap enzim amilase, enzim maltase, enzim tripsin dan pengaruh empedu terhadap lemak. Enzim diekstrak dari ikan mas (Cyprinus carpio).

Ikan Mas merupakan salah jenis ikan konsumsi air tawar, berbadan  memanjang pipih ke samping dan lunak. Sampai saat ini sudah terdapat 10 ikan mas yang dapat diidentifikasi berdasarkan karakteristik morfologisnya. Mulut terletak di ujung tengah dan dapat disembulkan. Bagian anterior mulut terdapat dua pasang sungut berukuran pendek. Secara umum, hampir seluruh tubuh ikan mas ditutupi sisik dan hanya sebagian kecil saja yang tubuhnya tidak ditutupi sisik. Sisik ikan mas ini berukuran relatif besar dan digolongkan dalam tipe sisik sikloid berwarna hijau, biru, merah, kuning keemasan atau kombinasi dari warna-warna tersebut sesuai dengan rasnya (Rochdianto, 2005). Ikan mas mudah diperoleh dan mudah dikembangbiakkan. Hal ini dikarenakan ikan mas mudah beradaptasi terhadap lingkungan dan makanan yang diperoleh.

Enzim

Enzim adalah satu atau beberapa gugus polipeptida (protein) yang berfungsi sebagai katalis (senyawa yang mempercepat proses reaksi tanpa habis bereaksi) dalam suatu reaksi kimia. Enzim bekerja dengan cara menempel pada permukaan molekul zat-zat yang bereaksi dan dengan demikian mempercepat proses reaksi. Percepatan terjadi karena enzim menurunkan energi pengaktifan yang dengan sendirinya akan mempermudah terjadinya reaksi. Sebagian besar enzim bekerja secara khas, yang artinya setiap jenis enzim hanya dapat bekerja pada satu macam senyawa atau reaksi kimia. Hal ini disebabkan perbedaan struktur kimia tiap enzim yang bersifat tetap. Sebagai contoh, enzim α-amilase hanya dapat digunakan pada proses perombakan pati menjadi glukosa. Enzim dipelajari dalam enzimologi (Campbell,1995).

Enzim membantu proses metabolisme di dalam tubuh. Enzim banyak terdapat pada makanan segar karena enzim sangat sensitive terhadap panas dan akan rusak dalam proses pemasakan dan pasteurisasi. Enzim berperan penting bagi kehidupan dengan cara menjalankan seluruh metabolisme tubuh. Kita tidak dapat mencerna atau menyerap makanan dan kita pun bisa mati jika tidak ada enzim dalam tubuh. Enzim adalah biokatalisator spesifik yang bergabung dengan koenzim (vitamin dan mineral) yang menjalankan roda kehidupan melalui metabolisme agar tubuh dapat berfungsi dengan baik. Pada umumnya kita sudah mengetahui kegunaan vitamin dan mineral bagi tubuh, akan tetapi kemungkinan besar Anda tidak menyadari bahwa vitamin tidak akan diaktifkan dalam tubuh sampai bergabung dengan enzim (Campbell,1995).

 Jumlah enzim yang kecil di dalam sel mempersulit pengukuran kadarnya di dalam ekstrak jaringan atau cairan. Untungnya, aktivitas katalitis yang dimiliki enzim dapat menjadi sarana pemeriksaan yang sensitive dan spesifik bagi pengukuran kadar enzim itu sendiri. Kemampuan mengatalitis transformasi ribuan, puluhan ribu, atau bahkan lebih molekul substat menjadi produk dalam periode waktu yang singkat memberikan kepada setiap molekul enzim kemampuan untuk secara kimiawi menguatkan keberadaannya (Lehninger, 1995).

Untuk mengukur kadar enzim di dalam sebuah sampel ekstrak jaringan atau cairan biologik lain, kecepatan reaksi yang dikatalitis oleh enzim dalam sampel tersebut harus ditentukan. Dalam kondisi yang tepat, hasil pengukuran kecepatan reaksi harus sebanding dengan jumlah enzim yang ada. Karena jumlah molekul atau massa enzim yang ada sukar ditentukan, hasil pengukuran tersebut dinyatakan dalam unit enzim. Jumlah relatif enzim dalam berbagai ekstrak kemudian dapat dibandingkan. International Union of Biocemistry mengartikan satu unit aktivitas enzim sebagai 1 mikromol (1 mmol; 10^-6) substrat yang bereaksi atau produk yang ditransformasikan per menit (Lehninger, 1995).

Susunan spasial dan kompartementalisasi enzim, substrat, serta kofaktor di dalam sel mempunyai makna yang teramat penting. Sebagai contoh, di dalam sel-sel hati, enzim untuk glikolisis terdapat di dalam sitoplasma sedangkan enzim untuk siklus asam sitrat di dalam mitokondria. Distribusi enzim diantara berbagai organel subselular dapat dipelajari setelah dilakukan fraksionasi homogenat sel melalui sentrifugasi berkecepatan tinggi. Kandungan enzim pada setiap fraksi kemudian diperiksa (http://id.wikipedia.org/wiki/Enzim).

Enzim Pencernaan pada Ikan Mas

Berikut ini adalah beberapa enzim yang berperan dalam pencernaan ikan mas diantaranya adalah:

1.      Tripsin

Tripsin adalah suatu enzim pemecah protein atau proteose, yang dihasilkan oleh sel-sel pankreas dalam bentuk molekul tripsinogen yang tidak aktif. Tripsinogen akan diaktifkan menjadi tripsin oleh enterokinase yaitu enzim yang dihasilkan oleh usus. Tripsin dapat bekerja maksimal pada pH 8-9. Pembuktian adanya enzim tripsin dapat dilakukan dengan uji biuret, apabila bahan uji mengandung protein yang memiliki dua atau lebih ikan peptida akan berwarna keunguan bila diuji dengan reagen biuret.

2.      Amilase

Amilase(α-amilase) terdapat pada saliva dan usus halus. Amilase berfungsi sebagai katalis dalam proses hidrolisis amilum, dekstrin dan glikogen menjadi maltosa. Maltosa adalah disakarida yang terbentuk dari dua molekul glukosa. Ikatan yang terjadi adalah antara karbon nomor 1 dan atom karbon nomor 4, oleh karenanya maltosa masih memiliki gugus –OH glikosidik dan demikian masih mempunyai sifat mereduksi. Maltosa merupakan hasil hidrolisis amilum dengan asam maupun enzim. Dalam tubuh amilum mengalami hidrolisis menjadi maltosa oleh enzim amilase. Pengujian enzim amilase dapat dilakukan dengan uji Benedict. Glukosa akan mereduksi Cu²⁺ menjadi Cu⁺ yang kemudian mengendap sebagai Cu₂O. Endapan yang terbentuk dapat berwarna hijau, kuning atau merah bata tergantung konsentrasi bahan uji yang diperiksa.

3.      Lipase

Lipase dalam cairan pankreas berfungsi sebagai katalis dalam proses hidrolisis lemak menjadi asam lemak, gliserol, monoasilgliserol dan diasilgliserol. Aktivitas enzim lipase dapat bertambah dengan adanya ion Ca²⁺ dan asam empedu, dan bekerja secara optimal pada pH 7-8,8.

A.    Empedu

             Komposisi empedu

·            97 % air

·            pigmen empedu :

- biliverdin → berwarna hijau

- bilirubin → berwarna kuning → mewarnai urine dan feses. Pada kasus kerusakan fungsi hati dimana bilirubin akan masuk dalam pembuluh darah sehingga seluruh jaringan di tubuh berwarna kuning (jaundice).

·            garam-garam empedu : terbentuk dari asam empedu yang berikatan dengan kolesterol dan asam amino. Setelah disekresi ke dalam usus, garam tersebut direabsorbsi dari illeum bagian bawah kembali ke hati dan di daur ulang kembali. Peristiwa ini dikenal sebagai sirkulasi enterohepatika garam empedu. (Ethel Sloane, 2003)

            Fungsi garam empedu dalam usus halus

·            emulsifikasi dan saponifikasi lemak : garam empedu mengemulsi globulus lemak besar dalam usus halus yang kemudian menghasilkan globulus lemak lebih kecil dan area permukaan yang lebih luas untuk kerja enzim.

·            absorbsi lemak : garam empedu membantu absorbsi zat terlarut lemak dengan cara memfasilitasi jalurnya menembus membran sel.

·            pengeluaran kolestrol dari tubuh : garam empedu berikatan dengan kolestron dan lesitin untuk membentuk agregasi kecil disebut micelle yang akan dibuang melalui feces(Ethel Sloane, 2003)

·            merangsang peristaltis usus sehingga empedu bekerja sebagai laksatif alamiah(Roger Watson, 2002).

·            empedu adalah saluran untuk ekskresi pigmen dan substansi toksik dari aliran darah, seperti alkohol dan bahan kimia lainnya(Roger Watson, 2002).

·            empedu juga berfungsi sebagai deodoran untuk feses, mengurangi bau yang menyengat. Hal ini semata-mata dihubungkan dengan kenyataan bahwa kekurangan garam-garam empedu berarti pencernaan lemak buruk, sehingga lemak di dalam usus tetap berlebihan, melapisi makanan lain dan mencegah pencernaan dan absorbsi. Akibatnya, protein dan lemak yang tidak tercerna diserang oleh bakteri pembusuk dan mengalami dekomposisi yang menghasilkan kelebihan hidrogen yang disulfurasi, yaitu gas yang menyebabkan bau feses abnormal, drainase yang menyengat, dan berbau seperti telur busuk (Roger Watson, 2002).

Kendali pada sekresi dan aliran empedu

              Sekresi empedu diatur oleh faktor syaraf (impuls parasimpatis) dan hormon (sekretin dan CCK) yang sama dengan yang mengatur sekresi cairan pankreas. Saat asam lemak dan asam amino mencapai usus halus, CCK dilepas untuk mengkontraksi otot kandung empedu dan merelaksasi sfingter Oddi. Cairan empedu kemudian didorong ke dalam duodenum (Roger Watson, 2002).

Kandung empedu

              Kandung empedu adalah kantong muskular hijau menyerupai pir dengan panjang 10 cm. Organ ini terletak di lekukan di bawah lobus kanan hati. Kapasitas total kandung empedu kurang lebih 30 ml sampai 60 ml. Fungsinya :

·       menyimpan cairan empedu yang secara terus menerus disekresi oleh sel-sel hati, sampai diperlukan dalam duodenum. Di antara waktu makan, sfingter Oddi menutup dan cairan empedu mengalir ke dalam kandung empedu yang relaks. Pelepasan cairan ini dirangsang oleh CCK

·       mengkonsentrasikan cairannya dengan cara mereabsorbsi air dan elektrolit. Dengan demikian kandung ini mampu menampung hasil 12 jam sekresi empedu hati(Roger Watson, 2002).

Tinjauan Bahan

·         Larutan Benedict

Larutan Benedict adalah larutan yang mengandung ion-ion tembaga(II) yang dikompleks dalam sebuah larutan basa. Larutan Benedict mengandung ion-ion tembaga(II) yang membentuk kompleks dengan ion-ion sitrat dalam larutan natrium karbonat. Pengompleksan ion-ion tembaga(II) dapat mencegah terbentuknya sebuah endapan - kali ini endapan tembaga(II) karbonat. Benedict merupakan reagen yang dapat membuktikan adanya zat yang mengandung glukosa dan turunannya, hasil yang positif memberikan endapan berwarna merah bata karena terbentuknya ikatan antara atom Cu atau tembaga yang berikatan dengan gugus aldehid dari glukosa yang bersifat aktif. Pada keadaan ini atom tembaga yang berada pada bentuk ioniknya dengan bilangan oksidasi 2 akan membentuk ikatan ionik dengan oksigen pada sisi aldehid atau keton membentuk endapan Tembaga(II) Oksida.(Sloane,2003).

·         Toluen

Toluen memiliki rumus struktur C₇H_8. Massa relative (Mr) 92,14 g/mol. Densitas toluen 0,8714 g/cm³. Sifat reaksi toluene pada kondisi 15 °C, 0,8669 g/cm³ (20 °C). mudah terbakar (http://Toluen - Wikipedia.mht). Toluen berfungsi sebagai pelarut materi organik sekaligus sebagai pengawet tanpa merubah struktur/ konformasi senyawa organik yang diawetkannya. Biasa digunakan dalam mikroteknik untuk membuat preparat apusan dari suatu untuk tujuan tertentu, membantu melekatkan pada kaca objek. Toluen ini bersifat nonpolar, sehingga tidak bisa bercampur dengan pelarut polar seperti air (Hart, 1998).

·         Amilum

Amilum digunakan sebagai sumber zat pati yang dapat dicerna oleh enzim amilase(Van de Graf,1994).

·         Biuret

Biuret merupakan reagen yang bersifat basa, sehingga gugus amin dari asam amino bertindak sebagai asam Dengan membentuk NH₄⁺. Reaksi menghasilkan senyawa basa NH₄OH yang menyebabkan larutan berwarna ungu.(Poedjiadi,1994).

·         Minyak goreng

Minyak goreng termasuk dalam lemak netral. Lemak netral adalah persenyawaan asam lemak dengan gliserol. Tiga molekul asam lemak (rantai panjang atom karbon dan hidrogen dengan satu gugugs karboksil di salah satu ujungnya) berikatan kovaln dengan satu molekul gliserol (satu molekul terdiri dari tiga karbon dengan tiga sisi gugus hidroksil) melalui proses sintesis dehidrasi. Minyak cenderung cair pada suhu kamar (Etjhel Sloane, 2004).

·         Gliserin

Gliserin adalah cairan bening, banyak dipakai untuk membuat sediaan obat. Persenyawaan gliserin dengan asam lemak membentuk lemak (Kamus Biologi Tarsito, 1999).

·         Telur

Telur ayam mempunyai struktur yang sangat khusus yang mengandung zat gizi yang cukup untuk mengembangkan sel yang telah dibuahi menjadi seekor anak ayam. Ketiga komponen pokok telur adalah kulit telur, putih telur a albumin dan kuning telur. Albumin mengandung protein, glukosa, lemak, garam dan air.

Alat dan Bahan

a. Alat

• Tabung reaksi                                   10 buah

• Botol warna gelap dan tutup                          1 buah

• Mortar dan alu                                    1 set

• Gelas piala                                          1 buah

• Pembakar spirtus                                1 buah

• Penjepit kayu                                      1 buah

• Pipet tetes                                           1 buah

• Rak tabung reaksi                               1 buah

• Gelas ukur 10 ml                                 2 buah

• Corong kaca                                        1 buah

• Kertas saring secukupnya

• Papan seksi                                          1 buah

• Dissecting set                                      1 set

b. Bahan

• Ikan mas dengan berat 300-350 g   1 ekor

• Akuades secukupnya

• Toluen 4-5 tetes

• Larutan kanji matang encer

• Maltosa

• Albumin/putih telur

• Minyak goreng secukupnya

• Giserin 50% 20 ml

• Reagen biuret

• Reagen benedict

• Korek api

Cara kerja

a. Membuat ekstrak usus

·         Bedahlah ikan mas pada bagian perutnya

·         Pisahkan usus dari organ lainnya secara hati-hati. Ambil usus halus dengan cara memotongnya dari bagian akhir lambung hingga awal usus besar.

·         Ambil kantung empedunya dengan hati-hati dan jangan sampai pecah.

·         Bukalah usus halus dengan cara menyayatnya secara longitudinal.

·         Bersihkan usus tersebut dengan akuades, kemudian masukkan ke dalam mortir.

·         Ambil 20 ml gliserin 50% dan masukkan ke dalam mortir, haluskan ususnya. Ambil 4-5 tetes toluen, haluskan kembali. Setelah halus, masukkan usus tersebut ke dalam botol, kemudian tutup rapat-rapat. Bungkus botol dengan kertas karbon.

·         Simpan ekstrak usus tersebut dalam ruang gelap selama 6-7 hari.

·         Setelah 6-7 hari, saringlah ekstrak usus tersebut dengan kertas saring.

·         Lakukan tes terhadap larutan hasil saringan tersebut yaitu tes pembuktian adanya amilase, maltase dan tripsin.

a.      Tes pengaruh empedu terhadap lemak

·         Sediakan dua tabung reaksi. Beri label kedua tabung A dan B. Tuangkan isi kantung empedu ke dalam tabung A dengan menggunting sedikit permukaannya.

·         Encerkan empedu tersebut dengan akuades sehingga volumenya menjadi 2 ml.

·         Masukkan 2 ml akuades ke dalam tabung B, sebagai kontrol.

·         Tambahkan ke dalam kedua tabung tersebut masing-masing 2 ml minyak goreng. Kocok keduanya kuat-kuat dan biarkan selama 5-10 menit. Amati apa yang terjadi pada kedua larutan dalam tabung tersebut. Bandingkan besarnya gumpalan lemak dalam masing-masing tabung.

c. Tes pembuktian adanya amilase

·         Sediakan dua tabung reaksi dan beri label A dan B. Tuangkan reagen benedict ke dalam tabung tersebut masing-masing 2 ml.

·         Siapkan dua tabung lain dan beri label C dab D.

·         Masukkan larutan kanji matang encer masing-masing 2 ml ke dalam tabung C dan D. Untuk tabung C tambahkan 1 ml ekstrak usus sedangkan tabung D tambahkan 1 ml akuades. Goyang kedua tabung tersebut selama 5-10 menit.

·          Teteskan sebanyak 5 tetes larutan dalam tabung C ke tabung A, dan larutan dalam tabung D ke tabung B.

·         Panaskan tabung A dan B selama 5 menit dan amati perubahan warna yang terjadi pada larutan tabung A dan B.

d. Tes pembuktian adanya maltase

Langkah pembuktian adanya maltase seperti langkah pengujian adanya amilase. Hanya saja larutan kanji encer diganti dengan maltosa.

e. Tes pembuktian adanya tripsin

·         Siapkan dua tabung reaksi dan berilah label A dan B. Masukkan ke dalam tabung masing-masing 1 ml putih telur yang sudah diencerkan. Panaskan kedua tabung tersebut hingga mendidih.

·         Dinginkan kedua tabung tersebut, setelah dingin masukkan 1 ml ekstrak usus ke dalam tabung A dan 1 ml akuades untuk tabung B. Diamkan 510 menit.

·         Teteskan masing masing 5 tetes reagen biuret ke dalam tabung A dan B. Amati perubahan warna yang terjadi pada masing-masing tabung.

HASIL DAN PEMBAHASAN

Hasil Pengamatan

Dari hasil pengamatan, maka dapat diperoleh data sebagai berikut :

A.     Tabel Hasil Percobaan Tes pengaruh Empedu terhadap Lemak

Perlakuan	Keadaan
	Warna sebelum	Warna sesudah dikocok selama 10 menit
Tabung A : 2 ml Cairan empedu + 2 ml minyak goreng	Terdapat dua lapisan. Lapisan atas merupakan minyak yang berwarna kuning keemasan dan lapisan bawah merupakan cairan empedu yang berwarna hijau tua.	Ukurannya Lebih kecil. Terdapat empat lapisan: 1.      Lapisan atas (pertama): terdapat buih/busa dengan warna bagian bawah buih kuning keruh 2.      Lapisan kedua: lapisan lemak berwarna oranye 3.      Lapisan ketiga: berwarna hijau muda 4.      Lapisan bawah (keempat): berwarna hijau tua ada endapan
Tabung B : 2 ml Aquades  + 2 ml minyak goreng	Terdapat dua lapisan Lapisan atas merupakan minyak yang berwarna kuning keemasan dan lapisan bawah merupakan aquades yang berwarna bening	Ukurannya Lebih besar Terdapat dua lapisan: Lapisan atas: berwarna oranye Lapisan bawah: berwarna putih keruh

B.  Tabel Hasil Percobaan Tes Pembuktian Adanya Amilase

Larutan	Perlakuan	Pengamatan
		Sebelum	Sesudah
Tabung A	1.   Diberi benedict 2 ml 2.   Diberi 5 tetes tabung C (berisi 1 ml ekstrak usus + 2 ml kanji matang encer dan goyang selama 5 menit) 3.   Dipanaskan selama 5 menit	Berwarna Biru	·       Berwarna Biru kehijauan ·       Ada endapan merah bata sedikit pada permukaan atas dan bawah
Tabung B	1.   Diberi reagen benedict 2 ml 2.   Diberi 5 tetes tabung D (berisi 1 ml akuades +  2 ml kanji matang encer dan goyang selama 5 menit) 3.   Dipanaskan selama 5 Menit	Berwarna Biru	·       Berwarna Biru ·       Tidak ada endapan

3. Tabel Hasil Percobaan Tes Pembuktian Adanya Maltase

Larutan	Perlakuan	Pengamatan
		Sebelum	Sesudah
Tabung A	1.   Diberi benedict 2 ml 2.   Diberi 5 tetes tabung C (berisi 1 ml ekstrak usus + 2 ml maltosa dan goyang selama 5 menit) 3.   Dipanaskan selama 5 menit	Berwarna Biru	·       Berwarna Merah bata (+++) ·       Ada endapan merah bata pada permukaan atas dan bawah
Tabung B	1.   Diberi reagen benedict 2 ml 2.   Diberi 5 tetes tabung D (berisi 1 ml akuades +  2 ml maltosa dan goyang selama 5 menit) 3.   Dipanaskan selama 5 Menit	Berwarna Biru	·       Berwarna Merah Bata (++) ·       Tidak ada endapan

D. Tabel Hasil Percobaan Tes Pembuktian Adanya Tripsin

Larutan	Perlakuan	Pengamatan
		Sebelum	Sesudah
Tabung A	1.   Diberi putih telur (1 ml) dipanaskan sampai mendidih 2.   Didinginkan, ditambah 1 ml ekstrak usus, didiamkan 5-10 menit 3.   Ditambah 1 ml NaOH (pekat) + 2 tetes CuSO4 sampai terjadi perubahan warna	Berwarna putih	·       Berwarna ungu (+++) ·       Ada endapan pada dasar tabung
Tabung B	1.   Diberi putih telur (1 ml) dipanaskan sampai mendidih 2.   Didinginkan, ditambah 1 ml akuades, didiamkan 5-10 menit 3.   Ditambah 1 ml NaOH (pekat) + 2 tetes CuSO4 sampai terjadi perubahan warna	Berwarna putih	·       Berwarna ungu (++) ·       ada endapan pada dasar tabung

Analisis Data

1.  Tes Pegaruh Empedu Terhadap Lemak

Analisis data tabel A (Tes pegaruh empedu terhadap lemak) yaitu, dapat dilihat bahwa pada perlakuan tabung A yang berisi cairan empedu yang sudah diencerkan dengan akuades sampai volumenya menjadi 2 ml, yang ditambahkan minyak goreng 2 ml sebelum dilakukan pengocokan, terdapat dua lapisan yaitu lapisan atas berwarna kuning keemasan yang merupakan minyak dan lapisan bawah berwarna hijau tua yang merupakan cairan empedu. Kemudian setelah dilakukan pencampuran dengan cara mengocok selama 5-10 menit, didapatkan hasil terdapat gumpalan lemak yang ukurannya lebih kecil daripada tabung B dan terdapat empat lapisan ; lapisan atas (pertama) terdapat buih/busa dengan warna bagian bawah buih kuning keruh, lapisan kedua: lapisan lemak berwarna oranye, lapisan ketiga: berwarna hijau muda, lapisan bawah (keempat): berwarna hijau tua dan terdapat endapan.

Tabung B yang berisi 2 ml akuades dan 2 ml minyak goreng sebelum dilakukan pengocokan terdapat dua lapisan yang tampak terpisah; lapisan atas berwarna kuning keemasan yang merupakan minyak dan lapisan bawah berwarna jernih yang merupakan aquades. Kemudian setelah dilakukan pencampuran (pengocokan) selama 5-10 menit, didapatkan ukuran lebih besar dan terdapat dua lapisan ; lapisan atas berwarna oranye dan terdapat gumpalan minyak besar-besar serta lapisan bawah yang berwarna putih keruh.

2.  Tes pembuktian adanya amilase, maltase dan tripsin:

Analisis data tabel B (Uji Amilase) yaitu, dapat dilihat bahwa pada perlakuan Tabung A yaitu diberi 2 ml benedict ditambah 5 tetes tabung C (berisi 1 ml ekstrak usus dan 2 ml kanji matang encer serta digoyang selama 5 menit), sebelum dipanaskan berwarna biru. Setelah tabung A yang berisi 2 ml benedict dan 5 tetes tabung C (berisi 1 ml ekstrak usus dan 2 ml kanji matang encer serta digoyang selama 5 menit), setelah dipanaskan 5 menit berwarna biru kehijauan dan ada endapan Cu₂O merah bata sedikit pada permukaan atas dan bawah.

Tabung B yaitu diberi 2 ml benedict ditambah 5 tetes tabung D (berisi 1 ml akuades dan 2 ml kanji matang encer serta digoyang selama 5 menit), sebelum dipanaskan berwarna biru. Setelah tabung B yang berisi 2 ml benedict dan 5 tetes tabung D (berisi 1 ml akuades dan 2 ml kanji matang encer serta digoyang selama 5 menit), setelah dipanaskan 5 menit berwarna biru dan tidak ada endapan.

Analisis data tabel C (Uji Maltase) yaitu, dapat dilihat bahwa pada perlakuan Tabung A yaitu diberi 2 ml benedict ditambah 5 tetes tabung C (berisi 1 ml ekstrak usus dan 2 ml maltosa serta digoyang selama 5 menit), sebelum dipanaskan berwarna biru. Setelah tabung A yang berisi 2 ml benedict dan 5 tetes tabung C (berisi 1 ml ekstrak usus dan 2 ml maltosa serta digoyang selama 5 menit), setelah dipanaskan 5 menit berwarna merah bata (+++) dan ada endapan Cu₂O merah bata pada permukaan atas dan bawah.

Tabung B yaitu diberi 2 ml benedict ditambah 5 tetes tabung D (berisi 1 ml akuades dan 2 ml maltosa serta digoyang selama 5 menit), sebelum dipanaskan berwarna biru. Setelah tabung B yang berisi 2 ml benedict dan 5 tetes tabung D (berisi 1 ml akuades dan 2 ml maltosa serta digoyang selama 5 menit), setelah dipanaskan 5 menit berwarna merah bata (++) dan tidak ada endapan.

Analisis data tabel D (Uji Tripsin) yaitu, dapat dilihat bahwa pada perlakuan Tabung A yaitu diberi 1 ml putih telur yang sudah diencerkan, dipanaskan sampai mendidih dan didinginkan,  maka akan berwarna putih. Setelah 1 ml putih telur ditambah 1 ml ekstrak usus sambil didiamkan 5-10 menit dan ditambah 1 ml NaOH serta beberapa tetes CuSO₄ sampai terjadi perubahan warna. Maka pada tetesan ke-2 berwarna ungu (+++) dan ada endapan pada dasar tabung.

Tabung B yaitu diberi 1 ml putih telur yang sudah diencerkan, dipanaskan sampai mendidih dan didinginkan, maka akan berwarna putih. Setelah 1 ml putih telur ditambah 1 ml akuades sambil didiamkan 5-10 menit dan ditambah 1 ml NaOH serta beberapa tetes CuSO₄ sampai terjadi perubahan warna. Maka pada tetesan ke-2 berwarna ungu (++) dan ada endapan pada dasar tabung.

Pembahasan

1.  Tes Pegaruh Empedu Terhadap Lemak

Berdasarkan analisis diatas yaitu tabel A (Tes pegaruh empedu terhadap lemak), Pada tabung A yaitu yang berisi cairan empedu yang sudah diencerkan dengan akuades sampai volumenya menjadi 2 ml, ditambahkan minyak goreng 2 ml. Sebelum dilakukan pengocokan, terdapat dua lapisan karena belum terjadi pencampuran, sehingga pada lapisan atas berwarna kuning keemasan yang merupakan minyak dan lapisan bawah berwarna hijau tua yang merupakan cairan empedu, keadaan ini dikarenakan berat jenis minyak lebih ringan daripada air sehingga minyak cenderung berada di atas dan zat-zat lain yang mengandung air berada di bagian bawah. Selain itu, minyak bersifat nonpolar, sedangkan air bersifat polar. Setelah dikocok, pada tabung A terlihat emulsi berwarna hijau muda keruh yang terbentuk karena pencampuran cairan empedu dengan minyak goreng Setelah itu tabung A didiamkan selama 5-10 menit, didapatkan hasil yaitu ukuran gumpalan lemak lebih kecil dari tabung B(kontrol) dan terdapat empat lapisan; lapisan atas (pertama) terdapat buih/busa dengan warna bagian bawah buih kuning keruh, lapisan kedua: lapisan lemak (berwarna oranye), lapisan ketiga: berwarna hijau muda, lapisan bawah (keempat): berwarna hijau tua dan ada endapan. 

Pada lapisan pertama(atas) terbentuk buih/busa karena dalam melakukan pengocokan terlalu lama dan terlalu keras. Sedangkan pada lapisan kedua adalah lapisan lemak berwarna oranye yang berbentuk gelembung-gelembung proses ini merupakan reaksi yang kurang sempurna dari getah empedu dalam mengemulsikan lemak dalam minyak. Untuk dapat larut dalam air, minyak harus dibungkus oleh emulator membentuk kilomikron yang ukurannya kecil, sehingga memudahkan kerja enzim lipase untuk mengubah minyak menjadi asam lemak dan gliserol. Pada lapisan ketiga adalah cairan empedu yang berwarna hijau muda yang telah mengikat lemak dan lapisan ke empat(bawah/dasar) berwarna hijau tua, ini merupakan sisa empedu yang tidak ikut mengikat lemak, terdapat pula endapan yang mungkin dikarenakan kurang bersihnya alat-alat yang digunakan sehingga masih ada sisa-sisa zat dari praktikum sebelumnya yang akhirnya mempengaruhi hasil percobaan.

Sedangkan pada tabung B yang berisi 2 ml akuades dan 2 ml minyak goreng dimana sebelum dilakukan pengocokan terdapat dua lapisan yang tampak terpisah karena belum terjadi pencampuran; lapisan atas berwarna kuning keemasan yang merupakan minyak dan lapisan bawah berwarna jernih yang merupakan aquades. Kemudian setelah dilakukan pencampuran (pengocokan) setelah itu didiamkan selama 5-10 menit, didapatkan ukuran gumpalan lemak lebih besar dan terdapat dua lapisan;  lapisan atas berwarna oranye (kuning keruh) dan terdapat gumpalan minyak besar-besar serta lapisan bawah yang berwarna putih keruh. Minyak goreng tidak larut dalam air karena tidak dibungkus oleh emulator yang membentuk kilomikron yang dapat melarutkan lemak dalam air.       

2.  Tes Pembuktian Adanya Amilase, Maltase dan Tripsin

Pembuktian adanya amilase, maltase, dan tripsin dilakukan dengan menggunakan reagen benedict dan biuret. Namun, dalam hal ini perlakuan yang dibedakan adalah campuran akuades dan ekstrak usus.

 Pada analisis tabel B (Tes pembuktian adanya amilase) pada perlakuan larutan tepung kanji matang encer (amilum) yang dicampur dengan akuades dan ditambahkan reagen benedict keadaan sebelum dan sesudah pencampuran adalah tetap yaitu berwarna biru dan tidak ada endapan. Hal ini dikarenakan tepung kanji matang encer (amilum) yang merupakan gula polisakarida tidak dapat dipecah menjadi gula yang lebih kecil yaitu gula disakarida oleh enzim amilase (di dalam akuades tidak terdapat enzim yang memecahnya) yang berarti tidak terjadi reaksi kimia sehingga tidak ada perubahan warna.

 Larutan tepung kanji matang encer (Amilum) terbentuk dari glukosa dengan jalan penggabungan molekul-molekul glukosa yang membentuk rantai lurus maupun bercabang dengan melepaskan molekul air. Tepung kanji matang encer (Amilum) dapat dihidrolisis sempurna dengan menggunakan asam sehingga menghasilkan glukosa. Hidrolisis juga dapat dilakukan dengan bantuan enzim amilase. Dalam ludah dan cairan yang dikeluarkan oleh pankreas (usus) terdapat amilase yang bekerja terhadap tepung kanji matang encer (amilum) yang terdapat dalam makanan. Oleh enzim amilase, tepung kanji matang encer (amilum) diubah menjadi maltosa dalam bentuk β maltosa. Pada perlakuan larutan tepung kanji matang encer (amilum) yang dicampur dengan ekstrak usus dan ditambahkan reagen benedict terjadi perubahan yaitu sebelumnya berwarna biru dan sesudah pencampuran menjadi biru kehijauan dan terdapat sedikit endapan Cu₂O berwarna merah bata pada permukaan atas dan bawah. Perubahan yang terjadi karena dalam usus ikan mas terdapat enzim amilase yang mengubah tepung kanji matang encer (amilum), (gula polisakarida) menjadi gula disakarida berarti terjadi reaksi kimia sehingga menimbulkan perubahan warna dan terdapat endapan merah bata.

        (C₆H₁₂O₆)n + n H₂O                             n C₆H₁₀O₆                          

Pada analisis tabel C (Tes pembuktian adanya maltose) Maltosa adalah disakarida yang terbentuk dari dua molekul glukosa. Ikatan yang terjadi ialah antara atom karbon nomor 1 dan atom karbon nomor 4, oleh karenanya maltosa masih mempunyai gugus –OH glikosidik dan dengan demikian masih mempunyai sifat mereduksi. Maltosa merupakan hasil antara dalam proses hidrolisis amilum (tepung kanji matang encer) dengan asam maupun dengan enzim. Telah diketahui bahwa hidrolisis amilum (tepung kanji matang encer) akan memberikan hasil akhir glukosa + glukosa. Dalam tubuh, amilum mengalami hidrolisis menjadi maltosa oleh enzim amilase. Maltosa ini kemudian diuraikan oleh enzim maltase menjadi glukosa yang digunakan oleh tubuh.

Pada perlakuan larutan maltosa yang dicampur dengan akuades dan reagen benedict tidak terjadi perubahan warna yang signifikan yaitu dari sebelum perlakuan berwarna biru dan setelah dipanaskan 5 menit menjadi berwarna merah bata (++) dan tidak ada endapan. Reagen benedict yang digunakan adalah reagen untuk pembuktian adanya kandungan glukosa dalam makanan. Pada larutan maltosa yang dicampur dengan akuades dan ditambahkan dengan reagen benedict tidak terjadi perubahan warna berarti larutan maltosa tidak mengandung karbohidrat karena pada larutan tersebut tidak ada enzim maltase yang dapat merubah maltase menjadi glukosa. Pada perlakuan kedua yaitu larutan maltosa yang dicampur dengan ekstrak usus kemudian ditambahkan dengan reagen benedict dari sebelum perlakuan berwarna biru dan setelah dipanaskan 5 menit menjadi berwarna merah bata (+++), ada terdapat endapan Cu₂O berwarna merah bata pada permukaan atas dan bawah. Perubahan ini terjadi karena pada usus ikan mengandung enzim maltase yang mengubah maltosa (gula disakarida) menjadi gula monosakarida (glukosa). Ikatan – iakatan pada maltosa dipecah oleh enzim yang terdapat pada usus ikan mas yang berarti terjadi reaksi kimia sehingga akan terjadi perubahan warna.

Tes pembuktian adanya tripsin. Tripsin adalah suatu enzim pemecah protein atau proteosa, yang dihasilkan oleh sel-sel pankreas dalam bentuk molekul tripsinogen yang tidak aktif. Tripsinogen diaktifkan menjadi tripsin oleh enterokinase, suatu enzim yang dihasilkan dalam usus. Pada perlakuan 1 ml putih telur yang sudah diencerkan, dipanaskan sampai mendidih dan didinginkan, maka akan berwarna putih. Setelah 1 ml putih telur ditambah 1 ml akuades sambil didiamkan 5-10 menit dan ditambah 1 ml NaOH serta beberapa tetes CuSO₄ sampai terjadi perubahan warna. Maka pada tetesan ke-2 berwarna ungu (++) dan ada endapan pada dasar tabung.

Sedangkan pada perlakuan 1 ml putih telur yang sudah diencerkan, dipanaskan sampai mendidih dan didinginkan, maka akan berwarna putih. Setelah 1 ml putih telur ditambah 1 ml ekstrak usus sambil didiamkan 5-10 menit dan ditambah 1 ml NaOH serta beberapa tetes CuSO₄ sampai terjadi perubahan warna. Maka pada tetesan ke-2 berwarna ungu (+++) dan ada endapan pada dasar tabung. Namun, warna ungu pada perlakuan yang dicampur dengan ekstrak usus berwarna ungu agak pekat (Ungu (+++)), sedangkan yang dicampur dengan akuades warna ungunya lebih muda atau memudar (Ungu (++)). Perbedaan ini terjadi karena pada perlakuan yang dicampur dengan akuades tidak terjadi reaksi kimia untuk mengubah larutan putih telur yang merupakan protein menjadi asam amino sehingga perubahan warna yang ditimbulkan adalah warna ungu memudar (++) dan dapat membuktikan bahwa dalam larutan putih telur tersebut mengandung protein.

Pada perlakuan yang dicampur dengan ekstrak usus perubahan warna yang terjadi menunjukkan warna ungu pekat (ungu (+++)). Hal ini dikarenakan karena pada ekstrak usus ikan mas terdapat enzim tripsin yang mengubah protein (putih telur) menjadi asam-asam amino, berarti terjadi reaksi kimia sehingga akan tampak adanya perubahan warna

Daftar Pustaka

Agus Rochdianto, 2005. Analisis Finansial Usaha Pembenihan Ikan Karper (Cyprinus carpio Linn) di Kecamatan Penebel, Kabupaten Tabanan, Bali. Skripsi S1 FE, Universitas Tabanan

Guyton & Hall, Artur C.,M.D. & John E.,Ph.D., 1997, Buku Ajar – Fisiologi Kedokteran, edisi 9, Penerbit Buku Kedokteran – EGC, Jakarta.

Junquiera, L. C & J. Carneiro. 1980. Basic Histology. Lange Medical Publication : London

Lehninger.A.L, 1995. Dasar-Dasar Biokimia. Erlangga, Jakarta

Watson, Roger. 2002. Anatomi dan Fisiologi untuk Perawat. Penerbit Buku Kedokteran EGC : Jakarta

www. iptek.net.id/ind/warintek/budidaya-perikanan/php. Budidaya Ikan Mas. terakhir diakses 20 Mei 2008

Yatim, Wildan. 1996. Histologi. Tarsito : Bandung

(http://Sistem pencernaan - Wikipedia Indonesia, ensiklopedia bebas berbahasa Indonesia.htm)